嘔吐毒素主體成分為DON（deoxynivalenol, 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇），屬于單端孢霉烯族化合物，主要由禾谷鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌、擬枝孢鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、雪腐鐮刀菌等鐮刀菌產生。因為該種物質可以引起豬產生嘔吐癥狀，故命名為嘔吐毒素。常見于大麥，小麥，玉米等谷物飼料中；嘔吐毒素對人和動物均有很強的毒性，能引起人和動物嘔吐、腹瀉、皮膚刺激、拒食、神經紊亂、流產、死胎等，豬是對嘔吐毒素zui敏感的動物。

上海安譜公司使用美國beacon 嘔吐毒素免疫親和柱以及美國 O2SI 的標準品參照GBT 23503-2009 的方法檢測面粉中的嘔吐毒素，并對其中注意點進行全面解析，給客戶提供一個完整的解決方案。

一：樣品前處理

稱取10g 面粉加入100ml 水，高速均質1 分鐘，用玻璃纖維濾紙過濾至澄清，取2ml 濾液作為待上樣液。

二：檢測前的準備和注意事項

1. 將所需的免疫親和柱在使用前回溫至室溫（20-25℃）。

2. 免疫親和柱的上下端有塑料塞子，在使用時可以取下。

3. 在使用的過程中避免免疫親和柱的干燥。例外情況為洗脫前短暫的排空和洗脫后的*排空

4. 過高的壓力或真空提取設備產生的負壓會壓緊凝膠而導致回收率降低。

三：小柱操作過程

• 將5ml 或10ml 注射器連接于免疫親和柱上端（通過小柱連接件）。

• 2ml 處理好的樣品液以1-2 滴/ 秒的速度通過親合柱，棄掉流出的液體。

• 以5ml 水淋洗柱子一次，棄掉流出的液體。

• 利用真空設備壓入空氣（約10 秒），確保排除所有的液體。

• 用1ml 甲醇緩慢洗脫（流速約為2-3 秒每滴），殘留的洗脫液使用空氣壓出或真空抽出（30 秒）并將洗脫液收集于干凈的收集管中。

• 將洗脫液吹干后加入1ml 流動相復溶，用于液相色譜檢測。

四：液相方法

色譜柱：C18-wp 150*4.6mm，5um

流動相: 甲醇：水=20:80

流速：1mL/min

柱溫：35℃

進樣量：50uL

檢測波長：218nm

五：實驗譜圖

圖一：面粉500ppb 加標

圖二：面粉基質空白

圖三：500ppb 標準譜圖

六：實驗數據

面粉                             樣品1                 樣品2

500ppb 加標回收率      94.2%                80%

七：實驗注意事項

認錯峰，誤認為回收率為0

95% 乙酸乙酯做溶劑的嘔吐毒素標準品譜圖

VS

純甲醇做溶劑的嘔吐毒素標準品譜圖

真相

客戶把標準品里面的溶劑乙酸乙酯誤認成嘔吐毒素的峰。從對比圖可看出：95% 乙酸乙酯做溶劑的標準品會帶來認錯峰的干擾。

一方面因為該實驗色譜條件中檢測波長：218nm；而乙酸乙酯的紫外截止波長為256nm，這意味著，乙酸乙酯在218nm 的波長下，照樣會有吸收，就算200ug/mL（200ppm）的濃度稀釋到1ppm，其中乙酸乙酯的濃度會達到4750ppm；這樣子標準品進樣的時候乙酸乙酯會在液相色譜有一個很大的吸收，相對而言1ppm 的嘔吐毒素顯得很小，客戶很容易誤認，后來客戶用乙酸乙酯進樣驗證確實是乙酸乙酯的峰。

另外一方面嘔吐毒素的化學結構，共軛體系不強，只有一個碳碳雙鍵和羰基共軛，這樣子在218nm 下吸收不強，導致其相對乙酸乙酯的峰來說，峰型很小，容易被客戶忽略，當小柱經過上樣，淋洗步驟后，乙酸乙酯*被洗掉，洗脫液里面只有甲醇，譜圖上不會出現乙酸乙酯的峰，所以才會出現客戶做出來回收率為零的假結果。

為了*解決這個問題，安譜新推出了用甲醇做為溶劑的標準品，從源頭上*解決這個問題。

CDGG-014445-06

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（嘔吐毒素）標準品

200ug/mL 于甲醇 1mL

八：試驗中用到的耗材

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